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    多肽合成方法

    發(fā)布時間:2023-05-15 瀏覽量:0
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    多肽是一種與生物體內各種細胞功能都相關的生物活性物質,它的分子結構介于氨基酸和蛋白質之間,是由多種氨基酸按照一定的排列順序通過肽鍵結合而成的化合物。多肽是涉及生物體內各種細胞功能的生物活性物質的總稱,常常被應用于功能分析、抗體研究、尤其是藥物研發(fā)等領域。

    1963年,Merrifield首次提出了固相多肽合成方法(SPPS),由于其合成方便,迅速,成為多肽合成的首選方法,而且?guī)砹硕嚯挠袡C合成上的一次革命,并成為了一支獨立的學科——固相有機合成,固相合成的發(fā)明同時促進了肽合成的自動化。世界上第一臺真正意義上的多肽合成儀出現在1980年代初期。

    運行原理

    多肽合成儀以固相合成為反應原理,在密閉的防爆玻璃反應器中使氨基酸按照已知順序(序列,一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端)不斷添加、反應、合成,操作最終得到多肽載體。固相合成法,大大的減輕了每步產品提純的難度。為了防止副反應的發(fā)生,參加反應的氨基酸的側鏈都是保護的。羧基端是游離的,并且在反應之前必須活化。固相合成方法有兩種,即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多優(yōu)勢,現在大多采用Fmoc法合成,但對于某些短肽,tBoc因其產率高的優(yōu)勢仍然被很多企業(yè)所采用。

    具體合成由下列幾個循環(huán)組成:

    1) 去保護:Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑(piperidine)去 除氨基的保護基團。

    2) 激活和交聯:下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化。活化的單體與游離的氨基反應交聯,形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅使反應完成。循環(huán):這兩步反應反復循環(huán)直到合成完成。

    3) 洗脫和脫保護:多肽從柱上洗脫下來,其保護基團被一種脫保護劑(TFA) 洗脫和脫保護。


    基本元件

    反應器

    數百年來,制藥業(yè)的反應器/反應釜 設備以玻璃材質最為常見,因其完全透明且耐腐蝕,而被眾多化學、生物學專家沿用。多肽合成的過程需要操作人員直觀監(jiān)測,同時合成后可進行在線切割(切割試劑TFA的強腐蝕性對反應器材質有了極大限制),這些要求限制反應器以玻璃材質最為適用。

    玻璃材質的反應器在制造工藝上有極大的難度限制:①燒制工藝:磨口精度要求極高,正如很多國產設備都無法達到要求出現漏液漏氣現象,玻璃壁均勻程度等。②配合攪拌柄以及密封裝置的成套加工工藝③防爆處理

    氨基酸儲罐

    溶劑儲罐

    量筒

    轉液瓶

    感應器

    多端觸發(fā)器自感應定量量取法,直觀、科學、相對誤差最低。

    廢液桶

    廢液桶通常選擇容積較大的HDPE桶,保證通風良好,同時需安裝感應器裝置時刻檢測廢液情況,避免溢出。

    END



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